免疫细胞无血清培养基
产品优势：
l 化学成份明确，完全不含任何动物来源的成份
l 严格按照cGMP标准生产，内毒素含量小于0.25EU/ml
l 培养性能优越，支持高密度单核细胞培养
产品应用：
l DC细胞、CIK细胞和NK细胞的长期增殖培养
l PBL细胞和TIL细胞的长期增殖培养
l 单核细胞和巨噬细胞的长期增殖培养
l T淋巴细胞的长期增殖培养
产品货号：
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名称 |
货号 |
规格 |
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免疫细胞无血清培养基 |
M019 |
1000mL |
保存条件：
2～8℃避光可保存14个月
★ 操作步骤
以下过程作为常规免疫细胞培养的一般准则。如需在生物反应器或培养袋高密度培养，应优化条件来确定******的操作步骤。
T细胞培养：
1、准备新鲜的外周血单个核细胞（PBMC）；或根据标准的外周血单个核细胞解冻程序，在37°C的水浴，快速解冻（<1分钟）冷冻小瓶的外周血单个核细胞
2、用生理盐水洗涤细胞，根据需要也可加入2～5％的热灭活的的人自体血浆。
3、计数细胞可以使用电子（即Coulter计数器，VI-细胞）或手动的方法（即血球计数仪）。
4、离心细胞，清除洗涤缓冲液。
5、培养初期，用含细胞因子（如IL-2）的培养基重悬PBMC；CD3+ T细胞密度保持在大约0.5-1×106/ mL。转移细胞到相应的细胞培养容器（培养袋、培养瓶）。随后可应用各种操作激活T细胞，包括添加刺激的抗体或抗原抗原呈递细胞。无论培养T细胞的规模大小，细胞均可被隔离，激活和扩大。
6、在37℃，5％CO2的潮湿培养箱。在潮湿的气氛中，在37°C，5％CO2孵育培养容器。在对数生长期细胞，需要维持细胞所需的浓度。为了保持细胞指数生长期，当细胞密度超过1×106/ mL时，需要分离传代，维持细胞密度在0.5-1×106/ mL（例如，2×106个细胞/ mL以上，按1：4比例0.5×106细胞/ mL）。在静态平板培养中为了获得******的气体交换，建议培养基深度不超过1到1.2厘米。
DC细胞培养：
1. 采集健康人外周血，肝素抗凝，以Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞(MNC)。
2. 用免疫细胞无血清培养基漂洗3次，调节细胞密度为1×106cells/mL。
3. 放置37℃，5% CO2孵育箱中贴壁培养2h，去除未贴壁的细胞和培养基，加入适量的免疫细胞无血清培养基，建议细胞密度为1×106cells/mL。
4. 加入rhIL-4（终浓度为500U/ml）和rhGM-CSF（终浓度为1000U/ml）到此培养基中，放置37℃，5% CO2孵育箱中继续培养。
5. 以后每隔2-3d半量换液，用含有rhIL-4（终浓度为500U/ml）和rhGM-CSF（终浓度为1000U/ml）的免疫细胞无血清培养基换液。
6. 在培养至第5d加入加入肿瘤抗原裂解物50μg/ml到此培养基中，刺激抗原特异性的DC细胞产生。
7. 在培养至第6d加入rhTNFα（终浓度为500U/ml）、rhIL-1β（终浓度为500U/ml）和rhIL-6（终浓度为500U/ml）到此培养基中。
8. 一般来说在细胞培养至第7d左右时，即诱导成为DC细胞。
CIK细胞培养：
1. 采集健康人外周血，肝素抗凝，以Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞(MNC)。
2. 用免疫细胞无血清培养基漂洗3次，调节细胞密度为1×106cells/mL。
3. 贴壁培养2h，收集悬浮细胞用免疫细胞无血清培养基调节细胞密度为1×106cells/mL。
4. 加入rhIFNγ（终浓度为2000U/ml），放置37℃，5% CO2孵育箱中培养24h。
5. 加入rhIL2（终浓度为1000U/ml）和CD3McAb（终浓度为100ng/mL），放置37℃，5% CO2孵育箱中继续培养。
6. 以后每隔2-3d半量换液，用含有rhIL2（终浓度为1000U/ml）的免疫细胞无血清培养基换液。
7. 一般来说在细胞培养至第15d左右时，即诱导成为CIK细胞。
